Experiments to eliminate Agrobacteria persisting in plants
Genetically engineered agrobacteria are routinely used to transform crop plants. These agrobacteria can obviously persist within the transgenic plants although they are not tumorgenic. Our attempts to eliminate the agrobacteria concentrate on the regeneration of secondary shoots from infected tobacco plants. Application of the antibiotics cefotaxim or carbenicillin during the regeneration process have not resulted in sufficient reduction of the bacterial contamination. Shoot tip culture of apical meristems, however, resulted in a large percentage of agrobacteria-free regenerated plants (within the detection limits). The degree of contamination was determined visually and by PCR (polymerase chain reaction).
In der Gentechnik werden routinemäßig Agrobakterien zur Transformation von Kulturpflanzen eingesetzt. Diese nichttumorgenen Agrobakterien können offensichtlich in den Pflanzen persistieren. Wir versuchen, aus solchen kontaminierten Pflanzen in der Gewebekultur neue, nicht kontaminierte Pflanzen zu regenerieren. Die Verwendung der Antibiotika Cefotaxim (Claforan) bzw. Carbenicillin während der Regeneration hat nicht zu einer ausreichenden Verminderung der persistierenden Agrobakterien geführt. Durch Anwendung der Meristemkultur aus apikalen SproBspitzen hingegen konnten erfolgreich Agrobakterien-freie Pflanzen (innerhalb der Nachweisgrenzen) erzeugt werden. Zur Bestimmung des Kontaminationsgrades wurden die visuelle Bonitur und die PCR (Polymerase-Kettenreaktion) verwendet.
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