Nachweis von methylierten Tri5 und Tri14 Trichothezen-Genen in Fusarium sporotrichioides mit der Endonuklease Msp JI bei Wirtspflanzen-Infektionen
Bei Fusarium sporotrichioides wurde die Methylierung von DNA der beiden Mykotoxin-Gene Tri5 und Tri14 bei verschiedenen Temperaturen und bei Infektionsbedingungen untersucht. Dazu wurde das Restriktionsenzym Msp JI verwendet, das DNA immer nur dann schneidet, wenn diese auch bei der Nukleotid-Folge Guanosin/Cytosin (G/C) methyliert ist. Unmethylierte G/C-haltige DNA wird von diesem Enzym nicht geschnitten, weshalb hier in einfacher Weise eine Unterscheidung in der Methylierung möglich ist. Eine Restriktion oder Nichtrestriktion wurde mit PCR-Primern nachgewiesen, die die Sequenzen beider Gene abdeckten. So war eine Methylierung der für die Mykotoxin-Gene Tri5 und Tri14 codierende DNA mit Msp JI nur nachweisbar, wenn F. sporotrichioides seine Wirtspflanzen Gerste und Mais erfolgreich infizierte. Alle anderen Bedingungen hatten keinen Einfluss auf die Methylierung der DNA beider Gene.
A survey was made for Fusarium sporotrichioides on its methylation of DNA by choosing the mycotoxin genes Tri5 and Tri14 and applying different temperature and infection conditions. The restriction endonuclease Msp JI was used which only digests DNA when the nucleotide sequence Guanosin/Cytosine (G/C) is methylated. Unmethylated G/C-DNA is not restricted by this enzyme and therefore a differentiation is possible in a simple way. A successful restriction and non-restriction was proved by using PCR-primer, covering both genes. Methylation of the coding DNA for the two mycotoxin genes Tri5 und Tri14 was detected by Msp JI, only when F. sporotrichioides infected its host plants barley and maize. All other conditions did not have any influence on the methylation of the two genes.
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