In vitro maturation of porcine oozytes in follicular fluid with subsequent effects on fertilization and embryo yield in vitro

Zur Verbesserung der Reifung von prozinen Kumulus-Oozyten-Komplexen (COC) in vitro wurde der Einfluß porziner Follikelflüssigkeit (pFF) auf die nachfolgende Fertilisation und Entwicklung zu späten Morulae/Blastozystenstadien unter In-Vitro-Bedingungen untersucht. Die COC wurden in Tissue Culture Medium (TCM) 199 unter Zusatz von 1 % fetalem Kälberserum (FCS) und 10 % pFF, gewonnen aus unreifen Follikeln (2-5 mm), mit oder ohne Zugabe von 1 mg/ml FSH inkubiert. Die Kontrollgruppen reiften in TCM 199 mit oder ohne FSH-Zusatz. Die aspirierte Follikelflüssigkeit wurde zentrifugiert (1700 x g, 5 min) und der Überstand bei -20° C in 1,5 ml Eppendorffcups aufbewahrt. An 7 Tagen wurden 3849 unreife COC aus Follikeln mit Durchmessern zwischen 2 und 5 mm aspiriert. Davon wurden 1117 COC für die Experimente ausgewählt, und 239 COC wurden nach einer 48stündigen In-Vitro-Reifung (39° C und 5 % CO2 in der Luft) fixiert und mit 1,5 % Aceto-Orcein gefärbt. Der Germinal-Vesicle-Breakdown (GVBD; 91,7 %) und die Entwicklung zur Metaphase II (60,4 %) waren überlegen (P<-0,05), wenn dem Reifungsmedium 10 % pFF und 1 ug/ml FSH zugesetzt worden waren. Weitere 878 COC wurden mechanisch von den Kumuluszellen befreit und für die In-Vitro-Fertilisation (IVF) verwendet. Achtzehn Stunden nach IVF wurden 561 Oozyten fixiert und mit Aceto-Orcein gefärbt. Zu diesem Zeitpunkt wurden keine Gruppenunterschiede gefunden. Andere 317 Embryonen wurden in NCSU 23-Medium bis zu Morulae- und Blastozystenstadien kultiviert. Die Teilungsraten waren 48 Stunden nach IVF signifikant verschieden (P<-0,05). Die Gruppe mit Oozyten, deren Reifungsmedium pFF und FSH enthielt, war der Gruppen mit Oozyten in TCM 199 ohne pFF und/oder FSH überlegen. Nach der Teilung wurden keine weiteren Unterschiede in der Entwicklung zu Morulae- und Blastozystenstadien festgestellt.