Isolation and characterization of monoclonal antibodies against structural proteins of infectious laryngotracheitis virus
Thirteen infectious laryngotracheitis virus (ILTV)-specific monoclonal anti- bodies (MAbs) were isolated after immunization of mice with purified infectious laryngotracheitis virions. On the basis of their reactions in western blot analyses of ILTV-infected cells, the MAbs were assigned to five different virus proteins or protein groups. Two of the viral target proteins could be identified after transient expression of cloned ILTV genes in eucaryotic cells. The MAbs of group II detected a 60-kD protein that was shown to be the ILTV homologue of herpes simplex virus type 1 (HSV-1) glycoprotein (g)C. The MAbs of group I reacted with the positional homologue of HSV-1 gJ, which is encoded by the open reading frame (ORF) 5 gene within the unique short genome region of ILTV. The ORF 5 gene product of ILTV was previously described as a 60-kD glycoprotein (gp60), whereas multiple protein bands with apparent molecular masses of 85, 115, 160, and 200 kD were identified in the present study. Immunoelectron microscopy revealed that both gC and gJ of ILTV are localized in the envelope of virus particles, whereas the 15-kD protein detected by the MAbs of group III presumably represents a tegument component. Immunofluorescence analyses of infected cells demonstrated that the epitopes of the gC- and gJ-specific MAbs are conserved in all tested ILTV isolates originating from different parts of the world and that these MAbs are also suitable for in situ antigen detection in tissues of ILTV-infected chickens. The remaining ILTV-specific MAbs recognized viral proteins of 22 kD (group IV) and 38 kD (group V) that were not further characterized up to now.
Se aislaron trece anticuerpos monoclonales específicos contra el virus de laringotraqueítis infecciosa después de inmunizar ratones con viriones purificados del virus de laringotraqueítis infecciosa. Los anticuerpos monoclonales se clasificaron en cinco grupos mediante la prueba de inmunotrasferencia puntual Western, con base en sus reacciones con proteínas virales o grupos proteicos en células infectadas con el virus de laringotraqueítis infecciosa. Se identificaron dos de las proteínas virales blanco luego de la expresión limitada de genes clonados del virus en células eucarióticas. Los anticuerpos monoclonales del grupo II detectaron una proteína de 60 kD que mostró ser homóloga con la glicoproteína C del virus herpes simplex 1. Los anticuerpos monoclonales del grupo I reaccionaron con la posición homóloga de la glicoproteína J del virus herpes simplex 1, la cual es codificada por el gen de marco abierto de lectura 5 localizado en la región corta única del genoma del virus de laringotraqueítis infecciosa. El producto del gen de marco abierto de lectura 5 fue descrito anteriormente como una proteína de 60 kD (gp60), mientras en el presente estudio se identificaron bandas proteicas múltiples con masas moleculares aparentes de 85, 115, 160 y 200 kD. Mediante la prueba inmunológica con el microscopio electrónico se reveló que las glicoproteínas C y J del virus de laringotraqueítis infecciosa se encuentran localizadas en la envoltura de las partículas virales, mientras que la proteína de 15 kD, detectada mediante los anticuerpos monoclonales del grupo III, se presume representa una parte del tegumento. Los análisis de inmunofluorescencia en células infectadas demostraron que los determinantes antigénicos de los anticuerpos monoclonales contra la glicoproteína C y la glicoproteína J son conservados en la totalidad de los aislamientos del virus de laringotraqueítis infecciosa provenientes de diferentes partes del mundo analizados, y que estos anticuerpos monoclonales son adecuados para la detección del antígeno in situ en tejidos de aves infectadas con el virus. Los anticuerpos monoclonales contra el virus de laringotraqueítis infecciosa restantes reconocieron proteínas virales de 22 kD (grupo IV) y 38 kD (grupo V), las cuales no habían sido caracterizadas anteriormente.
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