Detection of H7 avian influenza virus directly from poultry specimens
Using clinical materials from experimentally infected poultry, we established an effective method for the preparation of viral RNA directly from tissue samples and eggs. Furthermore, our type A–specific matrix reverse transcription–polymerase chain reaction (RTPCR) test was improved, and an H7 subtype–specific nested RT-PCR, which includes the hemagglutinin cleavage site, was designed. Both RT-PCR systems proved to be as sensitive as virus isolation. In addition, the labeled H7 HA-nested PCR primers were suitable for sequencing of the PCR products. The RT-PCR amplification of viral RNA and sequencing of the PCR product allows for the sensitive and rapid differentiation between low-pathogenic and highly pathogenic avian influenza viruses.
Deteccio´n de virus de influenza aviar H7 directamente de especı´menes aviares. Mediante el uso de materiales clı´nicos provenientes de aves infectadas experimentalmente, se establecio´ un me´todo efectivo para la preparacio´n de ARN viral directamente de muestras de tejido y huevos. Adema´s, se mejoro´ una prueba de RT-PCR especı´fica para matriz tipo A y un RT-PCR anidado especı´fico del subtipo H7, que incluye el sitio de desprendimiento de la hemoaglutinina. Ambos sistemas de RT-PCR demostraron ser tan sensibles como el aislamiento viral. Por otra parte, los iniciadores marcados de PCR anidado para la hemoaglutinina H7 fueron adecuados para secuenciar los productos de PCR. La amplificacio´n de ARN viral por RT-PCR y la secuenciacio´n de los productos de PCR permitieron una diferenciacio´n sensible y ra´pida entre virus de influenza aviar de baja y de alta patogenicidad.
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