Salmonella real-time PCR detection

Zusammenfassung: Salmonellen zählen zu den bedeutendstenbakteriellen Erregern weltweit, die meist durch die Aufnahmevon belasteten Lebensmitteln eine Erkrankung bei Menschenund auch Tieren verursachen können. Verfahren für den Nachweisvon Salmonellen in Lebensmitteln haben daher für die diagnostischenRoutinelabore eine besondere Bedeutung. Hier beschreibenwir zwei verschiedene real-time PCR basierte Verfahrenzum Nachweis von Salmonellen in Lebensmitteln. Das Verfahrenbeginnt mit einer kulturellen Voranreichung in gepufferten Peptonwasserfür 18 bis 24 h bei 37 °C und darauf folgender selektiverAnreicherung in Rappaport-Vassiliadis Medium für sechs Stundenbei 42 °C. Anschließend erfolgt eine mikrobielle DNA-Extraktionund der Nachweis der Salmonella DNA im Extrakt mittels der realtimePCR. Beide Verfahren unterscheiden sich in der Zielsequenzder nachzuweisenden Salmonella DNA. Während der eine PCRAssay ein 285-bp-DNA-Fragment des invA Gens amplifi ziert, weistder zweite Assay ein 95-bp-DNA-Fragment des ttrC/ttrA-Gens vonSalmonellen spezifi sch nach. Eine interne Amplifi kationskontrolle,die in jeder PCR-Reaktion mitgeführt wird, zeigt den funktionsrichtigenAblauf jeder PCR-Reaktion an. Die Gesamtdauer desNachweises beträgt 24 bis 28 Stunden. Abstract: Salmonella belongs to the most important bacterialpathogens worldwide causing disease in humans and animalsmainly by the oral uptake of contaminated food. Consequently,detection methodologies for Salmonella from food items aremeaningful for routine laboratories. Here, we describe two differentreal-time PCR based methods for the detection of Salmonellain food. The procedure begins with a cultural pre-enrichmentin buffered peptone water for 18-24 hours at 37 °C followed by aselective enrichment step in Rappaport-Vassiliadis medium for atleast six hours at 42 °C. Next, the microbial DNA is extracted andfi nally Salmonella-DNA is specifi cally detected by the real-timePCR. Both methods differ in the Salmonella target gene sequence.One assay amplifi es a 285-bp-DNA-Fragment of the invA-gene,and the other a 95-bp-DNA-Fragment of the ttrC/ttrA-gene. An internalamplifi cation control indicates the correct carrying out ofthe PCR. The duration of both detection methods is between 24and 28 hours.